布病虎紅平板凝集抗原的使用方法及注意事項(xiàng)

虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT，Rose Bengal Test）是國(guó)際貿(mào)易中牛、羊、豬布魯氏菌病檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)，在我國(guó)也用于人布魯氏菌病監(jiān)測(cè)的初篩。抗原是經(jīng)培養(yǎng)滅活后，離心收集菌體用虎紅染料染色后懸浮于乳酸緩沖液中制成。由于所用的抗原是酸性（ PH3.6-3.9 ）帶色的抗原，該抗原與被檢血清作用時(shí)能抑制血清中的IgM類抗體的凝集活性、檢查的抗體是IgG類，因此提高了反應(yīng)的特異性。該方法靈敏度高，操作方便，檢測(cè)快速且價(jià)格便宜，適于動(dòng)物群體布魯氏菌病的普查。

布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)具體操作方法如下:

一、材料準(zhǔn)備

1、布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原、布魯氏菌標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清、布魯氏菌陰性血清。

2、受檢血清應(yīng)新鮮,無(wú)明顯蛋白凝塊,無(wú)溶血。

3、潔凈的玻片或玻璃板。在其上劃分成4cm2的方格。

4、微量移液器及無(wú)菌吸頭。

5、干凈牙簽或火柴桿。

二、操作方法

1、在玻璃板各方格標(biāo)記受檢血清編號(hào),然后加入相應(yīng)的血清25μL（動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)GB/ 18646-2018）。

2、在各待檢血清旁滴加虎紅抗原25μL。

3、用滅菌牙簽類小棒快速混勻血清和抗原，涂成2cm直徑的圓形，于4分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。

三、結(jié)果判定

在標(biāo)準(zhǔn)陰性血清不出現(xiàn)凝集、標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清出現(xiàn)凝集時(shí)，試驗(yàn)成立，方可對(duì)受檢血清進(jìn)行判定。凡出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者（“+"以上反應(yīng)）判為陽(yáng)性。

虎紅平板凝集試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)：

“—"無(wú)凝集,呈均勻粉紅色

“+"稍能查到凝集,稍有卷邊形成,凝集物間液體呈紅色。

“++"形成較明顯卷邊,凝集塊間液體稍清亮。

“+++"凝集反應(yīng)較強(qiáng),液體較清亮。

“++++"凝集塊呈菌叢狀,凝塊間液體明顯清亮。

四、注意事項(xiàng)

布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原儲(chǔ)藏溫度:2-8℃，使用前需充分搖勻，務(wù)必恢復(fù)至室溫或18度以上后再檢測(cè)。

試驗(yàn)應(yīng)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陰、陽(yáng)性血清對(duì)照。