培養(yǎng)基的選擇及更換

盡管絕大多數(shù)細(xì)胞系都可以在不止一種培養(yǎng)基內(nèi)生長，客戶既可以選用來自不同供應(yīng)商的商品化培養(yǎng)基，也可以使用自行配制的培養(yǎng)基。但是，值得注意的是，來自不同供應(yīng)商的培養(yǎng)基，即便是擁有類似甚至相同的名稱，配方及培養(yǎng)細(xì)胞的性能等方面也不盡相同。而自行配制的培養(yǎng)基，雖然成本很低，但是一方面配制比較繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。另一方面，配制*培養(yǎng)基所需要的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、細(xì)胞添加因子、血清等原材料極有可能存在批次間的差異，很難保證不同批次*培養(yǎng)基的穩(wěn)定性。

此外，任何培養(yǎng)條件的改變都有可能造成細(xì)胞系特性的改變。因此，為保證整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中細(xì)胞系的穩(wěn)定，建議從一開始就選用推薦使用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)基添加物等培養(yǎng)體系進(jìn)行培養(yǎng)。

在某些特殊情況下，如確實(shí)需要更換培養(yǎng)基，可按照以下步驟進(jìn)行操作，逐步使細(xì)胞適應(yīng)新的培養(yǎng)基：

1. 以1:2的傳代比例將細(xì)胞一分為二到兩個(gè)新的培養(yǎng)皿內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，其中一個(gè)培養(yǎng)皿作為對(duì)照，繼續(xù)使用原來的培養(yǎng)基培養(yǎng)。另一個(gè)培養(yǎng)皿作為實(shí)驗(yàn)組，使用新舊培養(yǎng)基按照1:1配比混合后的培養(yǎng)基培養(yǎng)。

注意：采用相對(duì)較低的傳代比例1:2進(jìn)行傳代，目的是緩解傳代過程及新培養(yǎng)基給細(xì)胞生長帶來的雙重壓力。

2. 分別監(jiān)測(cè)兩個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)細(xì)胞形態(tài)、生長速率等方面的變化。如果兩個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)的細(xì)胞沒有明顯差異，則接下來仍然按照1:2的傳代比例分別進(jìn)行第二次傳代。對(duì)照組仍然使用舊的培養(yǎng)基培養(yǎng)，而實(shí)驗(yàn)組則采用新舊培養(yǎng)基按照3:1配比混合（25% original, 75% new）后的培養(yǎng)基培養(yǎng)。

3. 繼續(xù)監(jiān)測(cè)兩個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)細(xì)胞形態(tài)、生長速率等方面的變化。如若兩者之間無明顯差異，則分別繼續(xù)進(jìn)行第三次傳代。在第三次傳代時(shí)仍然按照1:2的傳代比例進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)組使用新舊培養(yǎng)基按照7:1（12.5% original, 87.5% new）配比混合的培養(yǎng)液培養(yǎng)。對(duì)照組仍使用舊的培養(yǎng)基培養(yǎng)。

4. 繼續(xù)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)、生長速率等方面的變化。如若兩者之間仍然無明顯差異，則分別按照1:2的傳代比例繼續(xù)進(jìn)行第四次傳代。此時(shí)，對(duì)照組仍使用舊的培養(yǎng)基培養(yǎng)，而實(shí)驗(yàn)組則*更換成新的培養(yǎng)基培養(yǎng)。此時(shí)，細(xì)胞應(yīng)該已經(jīng)*適應(yīng)新的培養(yǎng)基了。

注：為確認(rèn)細(xì)胞是否已經(jīng)*適應(yīng)新的培養(yǎng)基，可以分別對(duì)兩組細(xì)胞進(jìn)行功能性測(cè)試。如果在功能性測(cè)試過程中任何一個(gè)時(shí)候，實(shí)驗(yàn)組表現(xiàn)與對(duì)照組不同，重復(fù)步驟2、3多傳幾代，直至與對(duì)照組細(xì)胞*一致。